高通量DSF快速分析热稳定性Tm方法在单抗NISTab中的应用

　　NISTmAb是一种广泛表征的单克隆抗体，旨在用作开发**蛋白表征新技术中的标样。在本应用文献中，我们使用SUPR-DSF来获取NISTmAb的差示扫描荧光法DSE)的教话，开洛结果与寿示扫描量热法DSO进行比较。SUPR-DSE解折了NISTAb所有的二个结构域：CH2(690C.CH3(830()和高解特汽度的FAB结构域(94oC)[1]。此外，所测得的Tm值与文献的报道一致。这些结果证明了，应用SUPR-DSF可以轻松获得高质量的蛋白质稳定性信息。
 

　　结论：
 

　　Protein Stable公司的SUPR-DSF可以通过检测蛋白质内源荧光的峰位移，并快速准确地测量解链温度。结果表明SUPR-DSF能够获得准确的解链温度，包括像Fab结构域这样的超高解链温度(94 0C)。这也验证了基于内源荧光法的SUPR-DSF可以获得与DSC一致的结果。利用384孔板进行测试的优势在于提高了通量，增加了便利性同时降低了样品的消耗。
 

　　方法：
 

　　浓度为1mg/ml的NISTmAb在pH6的L-组氨酸缓中液中进行配制，分别加到384孔LPCR微孔板中，每个孔用量是104L。分装后，将微孔板离心60秒后，用透明胶膜密封。将SUPR-DSF中的连续升混程序设置成以每分钟10C的升温速率测量150C到105oC的荧光光道，荧光光谱所获得的数据，通过BCM方法进行计算处理，并量化光谱偏移。BCM的数据会处理成温度的函数，并转换成一阶导数再进行分析。根据导数的峰值计算解链温度。所有样品的方法和结果均可获取。